NY∕T 3278.3-2018 微生物农药 环境增值试验准则 第3部分:植物叶面(农业)

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2021-12-24

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ICS 65.020,B17 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3278.3一2018,微生物农药环境增殖试验准则,第3部分:植物叶面,Environmental reproduction test guidelines for microbial pesticidesPart,3 ~ Foliar surface,2018 - 07 - 27 发布2018 - 12-01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,NY/T 3278. 3-2018,前言,NY/ T 3278 ((微生物农药环境增殖试验准则)) ,分为3 个部分:,一一第1 部分: 土壤;,一一第2 部分:水;,一一第3 部分: 植物叶面,本部分为NY/ T 3278 的第3 部分,本部分按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任,本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口,本部分起草单位:农业农村部农药检定所、环境保护部南京环境科学研究所,本部分主要起草人:谭丽超、周艳明、卡元卿、廖建华、袁善奎、姜辉、蒋金花、吕露,I,范围,微生物农药环境增殖试验准则,第3 部分:植物叶面,本部分规定了微生物农药植物叶面,报告等的基本要求,本部分适用于农药登记而,2 规范性引用文件,下列文件对于本,件。凡是不注日期的,GB 15618,3 术语和定义,下列术语,3. 1,微生物,NY/T 3278.3-2018,、数据处理、质量控制、试验,以细菌、真矗I~帚锺铺盖革虽苟摒巍物缰鳝疆疆疆篝疆疆命咀E、虫、草、,鼠等有害生,3. 2,供试物,试验,3. 3,3. 4,菌落形成单位,由单个菌,细菌芽抱bacterial,某些细菌在其生长发育,眠体,3. 5,真菌抱子fungal spore,真菌的主要繁殖器官。分为有性抱子和无性抱子两大类。抱子在适宜条件下发芽,形成菌丝而进,行分裂繁殖;当外界环境不适宜时,可以呈休眠状态长时间生存,3. 6,细菌抱囊bacterial cyst,某些细菌尤其是一些固氮菌在外界缺乏营养的条件下,由整个营养细胞外壁加厚、细胞失水而形成,的一种抗干旱但不抗热的圆形休眠体,1,NY/T 3278. 3-2018,3. 7,原生动物抱囊protozoan cyst,某些原生动物在外界环境不利条件下,形成的能高度抵抗干旱、冰冻和高温的休眠体,3. 8,细菌营养体吨etative bacterium,单个活的生物体,通常是指能在合适的培养基上形成一个CFU 的实体,3. 9,原生动物protozoa,最原始、最低等的单细胞动物。原生动物除了具有真核细胞的一般特征(具细胞膜、细胞核和细胞,质等)外,其细胞本身是一独立完整的有机体,通过细胞内和细胞表面的一些特殊细胞器来完成运动、营,养和生殖等生命活动,3. 10,宿存survival,具有活性的微生物在施用后的一段时间内可在动物、土壤或植物内体或表面保持活性的状态,3. 11,增殖multiplication,微生物生长到一定阶段,由于细胞结构的复制与重建并通过特定方式产生新的生命个体,即引起生,命个体数量增加的生物学过程,3. 12,延滞期lag phase,少量微生物接种到新鲜培养基后,在开始培养的一段时间内,因代谢系统适应新环境的需要,微生,物数目没有增加的一段时期,3. 13,指数期log phase,在生长曲线中,紧接着延滞期的一段微生物数量以几何级增长的时期,3. 14,稳定期stationary ph描e,新增殖的微生物数量与衰亡的微生物数量相等的时期,这个时期的菌体数量达到最高,3. 15,衰亡期death ph描e,微生物的个体死亡速度超过新增殖速度,整个群体呈现负生长状态的时期,4 试验概述,将供试物喷施于植物叶面上,在适宜的条件下培养,定时取样测定其数量,得到供试物在植物叶面,上的动态变化,5 试验方法,5. 1 材料和条件,5. 1. 1 试验用植物,推荐棉花作为试验用植物,也可以选择生物农药登记作物或其他具有重要经济、生态价值的植物,植物种子表面消毒后播种于人工基质或自然土壤,自然土壤符合GB 15618 二级标准的要求,放置在温,度、湿度、光照等条件适宜的温室或人工气候箱中,适时挠灌无菌水,待种子发芽生长至苗期(30 d~,40 d) 时,选择健康植株待用,5. 1. 2 供试物,5. 1.2. 1 类型,供试物包括微生物农药母药、制剂产品,5. 1. 2. 2 批次,试验中供试物应采用同一批次的产品,5. 1. 3 主要仪器设备,超净工作台,磁力搅拌器,灭菌锅,显微镜,分光光度计,荧光定量PCR 仪,温度计,电子天平,5. 2 试验操作,8 株~10,5. 2. 2 接种量,接种浓度为,菌株接种浓度,在超净工作台,气候箱中,适,光照等培养参数。上,5. 2. 4 取样,旋振荡器振荡10 min) ,进行计数,的具体生长情况调整,5. 2. 5 计数方法,5. 2. 5. 1 细菌、放线菌、真菌、酵母,NY/T 3278. 3-2018,元菌水振荡分离(涡,间隔时间可根据供试物,以CFU 为计数单位,可采用绿色荧光蛋白基因标记-平板计数法(参见附录A) 测定,以基因拷贝数为计数单位,可采用分子标记-荧光定量PCR 法(参见附录B) 测定,5. 2.5. 2 原生动物、真菌抱子、酵母,以个体数目为计数单位,可采用直接计数法(参见附录。等测定,5. 2. 6 试验周期,试验持续时间应能够反映供试物的延滞期、指数期、稳定期和衰亡期,或在28 d 内检……

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